Evaluation of phenotypic methods for the detection of carbapenemases applicable to low complexity laboratories

Abstract

The spread of carbapenemase-producing gram-negative bacilli is a global public health problem. Several authors have proposed phenotypic assays to presumptively detect these enzymes applicable to low and medium complexity laboratories. In the present study, we have developed and compared different phenotypic techniques using strains genetically identified as carbapenemase-producing. All the tested methods detected the presence of carbapenemases. The carbapenem inactivation method (MIC) and the modified carbapenem inactivation method with and without EDTA (mMIC-eMIC) were the simplest and easiest to interpret but their disadvantage was on the time required to obtain results. The direct Carba NP and Carba-Blue colourimetric methods were the fastest but they depend on reagent preparation and accurate pH adjustment of the solutions. Synergy methods with EDTA discs, boronic acid and the Triton Hodge Test (THT) require technical expertise to evaluate true synergism. Whereas, the Disk Carbapenemase Test (DCT) was the method that presented the greatest technical difficulties.

La diseminación de bacilos gramnegativos productores carbapenemasas es un problema mundial de salud pública. Diversos autores han propuesto ensayos fenotípicos para detectar presuntivamente estas enzimas aplicables a laboratorios de baja y mediana complejidad. En el presente trabajo, hemos puesto a punto y comparado diferentes técnicas fenotípicas utilizando cepas identificadas genéticamente como productoras de carbapenemasas. Todos los métodos analizados detectaron la presencia de carbapenemasas. El método de inactivación de carbapenemes (MIC) y el método de inactivación de carbapenemes modificado con y sin EDTA (mMIC-eMIC) fueron los más sencillos y de fácil interpretación pero presentan la desventaja del tiempo necesario para obtener resultados. Los métodos colorimétricos Carba NP directo y Carba-Blue resultaron los más rápidos pero dependen de la preparación de reactivos y de un exacto ajuste de pH de las soluciones. Los métodos de sinergia con discos de EDTA, ácido borónico y el Triton Hodge Test (THT), requieren experiencia técnica para evaluar verdadero sinergismo. Mientras, que el Disk Carbapenemase Test (DCT) fue el método que presentó mayores dificultades técnicas.