Optimización de la técnica SSCP-HD para la detección de polimorfismos en el exón 3 del gen ADIPOQ

Abstract

Los polimorfismos del gen de la adiponectina están relacionados con alteraciones en su expresión con la subsecuente disminución en los niveles plasmáticos de adiponectina, esto último se encuentra asociado a la insulino-resistencia, obesidad e hipertensión arterial, todos factores de riesgo para enfermedades cardiovasculares y oncológicas. El objetivo del trabajo fue estandarizar una reacción de amplificación, PCR, seguida de detección mediante SSCP-HD (polimorfismo de conformación de cadena simple-heterodúplex) para el análisis de los polimorfismos de simple nucleótido (SNPs) presentes en el exón 3 del gen ADIPOQ.Las extracciones de ADN se realizaron por el método Salting-Out modificado, los cebadores fueron analizados mediante programas bioinformáticos, y los fragmentos obtenidos fueron analizados mediante la técnica de Polimorfismo en la Cadena Simple-Heterodúplex (SSCP-HD). Con las condiciones utilizadas se logró la amplificación del exón 3 de ADIPOQ, identificándose patrones de corridas mediante la técnica de SSCP-HD que facilitarán el estudio posterior de los polimorfismos de simple nucleótido en el gen seleccionado.

Polymorphisms of the adiponectin gene are associated with alterations in expression with subsequent decrease in plasma levels of adiponectin. The latter is associated with insulin resistance, obesity, and hypertension, all risk factors for cardiovascular disease and cancer.The objective of the present work was to standardize an amplification reaction, PCR, followed by detection by SSCP-HD (strand conformation polymorphism-heteroduplex simple) for the analysis of single nucleotide polymorphisms (SNPs) present in exon 3 of the gene ADIPOQ.DNA extractions were performed by the modified salting-out method, the primers were analyzed using bioinformatics programs, and the fragments were analyzed by the technique of Polymorphism, Single-Stranded-Heteroduplex (SSCP-HD). With the conditions used, the amplification of exon 3 of ADIPOQ was possible, identifying patterns of runs using the technique of SSCP-HD which will facilitate further studies of single nucleotide polymorphisms in the gene selected.